經逆行示蹤金標準-熒光金（Fluoro-Gold）

簡介：

Fluorochrome 1985年創立于美國，長期致力于熒光染料的研發工作，其特色產品熒光金（Fluoro-Gold）自1985年問世以來已在全球范圍獲得廣泛應用，擁有大量文獻引用。熒光金（Fluoro-Gold）是目前全球應用廣泛、效果較好的神經元逆行追蹤劑；熒光金（Fluoro-Gold）的使用方法與其他熒光示蹤劑基本相同，主要區別在于其在注射后存活時間、濃度范圍、組織處理以及與其他組織化學技術的兼容性方面具有更強的靈活性。

保存和效期：

熒光金干粉需要4℃避光保存。按要求保存，效期可超過1年。溶解后的熒光金也應4℃避光保存，溶解后效期至少6個月。

溶劑選擇：

熒光金可溶于蒸餾水或0.9%生理鹽水，也可配成0.2M中性磷酸鹽緩沖液的懸浮液使用。

工作濃度：

熒光金的有效使用濃度為1%-10%，建議初始采用4%濃度。若注射部位出現組織壞死或標記信號過強，可將濃度降至2%。需精確計量時，請參考熒光金分子量532.6Da。

給藥方式：

A. 壓力注射：常用方法，注射體積0.05-1ul，典型用量0.1-0.2ul。

B. 離子電滲：采用4-10秒脈沖式離子電滲（5至10微安/10分鐘）可形成精確的微小注射位點。

C. 晶體植入：可通過微玻管頂端直接植入晶體形態的示蹤劑。

術后存活時間

逆行標記效果在術后2天至2個月內均有效，典型存活期為3-5天。較長存活期有助于染料充分填充遠端神經突觸，且不會出現細胞染料擴散現象。

固定處理

可采用任意固定劑或不固定：常用4%甲醛磷酸鹽中性緩沖液。含高濃度重金屬（如鋨、汞）的固定劑會淬滅熒光，而高濃度戊二醛（＞1%）可能增加背景熒光。

組織化學處理

含熒光金的組織可適用于幾乎所有常規組織學技術：包括未固定組織的冰凍切片（10um）、固定組織的冷凍切片（20um）、塑料包埋薄切片（0.2-4um）及石蠟切片（3-10um）。常用的是固定組織的冷凍切片。

組合標記方法

切片可進一步進行第二種標記物的處理，包括：放射自顯影術、HRP組織化學法、免疫細胞化學法、第二種熒光示蹤劑、熒光復染等技術。

貼片、透明與封片

切片通常貼附于明膠包被的載玻片，空氣干燥后浸入二甲苯透明，最后采用非熒光DPX塑料封片劑封片。除非與第二種示蹤劑存在兼容性問題，否則可通過梯度酒精進行脫水處理。若需將金熒光與熒光免疫細胞化學技術聯用，切片應空氣干燥后直接使用中性緩沖甘油（1:2比例）封片。

熒光金檢測

熒光金可通過熒光顯微鏡配合寬波段紫外線激發濾光片進行觀測。當組織經中性pH緩沖液處理時會發射金色熒光，而經酸性緩沖液（如pH 3.3）處理時則呈現藍色熒光。可采用數碼攝影成像。多數曝光時間介于10-60秒之間，具體取決于物鏡放大倍數和標記強度，30秒曝光為常用參數。可通過多重曝光技術同時觀測熒光金與其他示蹤劑：結合紫外光源與明場照明可同步定位熒光金與HRP標記物或放射自顯影的銀顆粒；采用藍光激發可同步顯示FITC的綠色熒光；使用綠光激發則可同步觀察碘化丙啶或溴化乙錠（熒光復染劑）的紅色熒光。

染色結果（示例）

產品信息：

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